분자생물학실험 이중 돌연변이 검증

분자생물학실험 이중 돌연변이 검증 [분자생물학실험] 이중 돌연변이 검증.hwp 목차 목 차 1. 서론 2. Material 3. 실험 방법 4. 실험결과 5. 고찰 6. 참고 문헌 및 출처 본문 2. Material ◉ 이중 돌연변이 제작 ① NGM 배지 ② single 돌연변이 c.elegans - RB1104(hsp3)과 RB1600(tub-1) ◉ PCR ① 10 x PCR buffer - 100mM tris, 500mM KCl, 15mM MgCl2 (pH 8.3) ② dNTP mixture - dATP, dTTP, dGTP, dCTP 의 혼합물로써 extesion 과정에서 template strand를 바탕으로 complement strand를 합성할 때 base pair를 위하여 필요. ③ primer : 2쌍이 필요 - tub1 에 대한 정방향과 역방향 - hsp3 에 대한 정방향과 역방향 ④ Taq polymerase 3. 실험 방법 ◉ 이중 돌연변이 제작 ① 두 개의 돌연변이 주를 각각 관찰하여, 수컷과 자웅 동체를 구별한다. - 웅체의 꼬리 쪽이 자웅동체에 비하여 가늘고 털 같이 보이는 것이 달려있음을 이용하여 현미경으로 관찰하여 구별한다. ② 웅체가 더 많이 존재하는 돌연변이 주를 선택하여, 웅체만 선별하여 새로운 배지에 옮겨준다. 다른 쪽 돌연변이 주에서는 자웅동체를 취하여 옮겨준다. 이 때 웅체와 자웅동체간의 mating을 유도해야 하므로 웅체의 개체수를 자웅동체의 수보다 많게하여 넣어준다. - 우리 조의 경우는 RB1104에서 웅체를 취하고, Rb1600에서 자웅동체를 취하였 본문내용 통하여 확인하고자 하는 실험이다. 먼저 c.elegans의 생물학적인 특성 중에 자웅동체와 웅체로 성별이 구별되는 것을 이용하게 된다. c.elegans의 성별은 사람과는 달리 XX와 XO로 정해지게 된다. 웅체(XO)는 생식세포 분열 시에 염색체 비분리 현상에 의하여 발생하게 되는데, 이의 빈도는 자웅동체에 비하여 굉장히 낮다. 자웅동체의 경우는 보통 난자를 1000개 이상을 만들고 320개 정도의 정자를 생산하게 된다. 따라서 자웅동체끼리의 자가 수정만으로도 후손을 생산할 수 있다. 이 후손의 유전형은 자웅동체의 그것과 일치하게 될 것이다. 하지만 이 경우, 우리가 확인하고자 하는 이중 돌연변이는 일어나지 않을 것이기 때문에 각각 하나의 돌연변이를 가진 개체 중에 자웅동체와 웅체를 개별적으로 선별하여 참고문헌 6. 참고 문헌 및 출처 - “C. elegans를 이용한 기능유전체학 ; 기능과 전망” 남승희, 이준호 (연세대학교 생물학과 발생학 연구실)