분자생물학실험 Sudan black B staining (선충의 지방세포관찰)

분자생물학실험 Sudan black B staining (선충의 지방세포관찰) [분자생물학실험] Sudan black B staining (선충의 지방세포관찰).hwp 목차 목 차 1. 실험 목표 및 배경지식 실험 목표(PURPOSE) 배경지식 -Sudan Black B Staining 2. 실험재료 및 실험방법 Materials Method <Fixation> 3. 결과 4.고찰 5.참고문헌 본문 Method <Fixation> &#61569;unstarved plate에서 자란 worm을 1ml의 S media로 washing해서 모은다.(미리 비만억제처리/4마리씩) &#61570;S media로 2~3회 정도 washing 한다.(bacteria 제거)->600g 으로 centrifuge(먹이를 씻어줌) &#61571;S media에 30분 정도 담가두어(얼음에-선충이 계속 벽을타고 올라오는 것을 방지) 창자에 있는 bacteria도 제거한다.(장에소화된것까지 나오도록) &#61572;centrifuge(600g)한 후, S media 로 한 번 더 washing 한다.(박테리아가 떠내려간다.) &#61573;final concentration 1%에 해당하는 4%의 paraformaldehyde(PF)stock을 넣고 잘 섞어준다. &#61574;LN2에 얼렸다가 녹인다. 1분 간격으로 3회 정도 반복한다. &#61575;10min 동안 얼음에 놓아둔다. <staining> &#61569;fixed한 worms를 500㎕의 cold PBS로 2번정도 washing 한다. (1000g->2mincentrifuge)25% ethanol 50㎕fh 2min dehydration한 후 60%, 70% ethanol로도 동일하게 수행한다.(PBS는 체액농도와 같기에 다르면 변형되므로 안정하기위해 이것을 사용한다.)/(탈수는 점점늘려야 효과적이다.) &#61570;ethanol을 제거하고 50㎕의 Sudan Black B Solution을 넣는다. 본문내용 방 조직의 변화를 관찰한다. 배경지식 -Sudan Black B Staining Sudan staining은 sudanophilic substances (특히 지방)를 염색하기 위해 사용된다. Sudan lysochromes (Sudan II, Sudan III, Sudan IV, Oil Red O, and Sudan Black B) 이 있다. 2. 실험재료 및 실험방법 Materials 4% paraformaldehyde(PF) Stock(세포 Fixation) Sudan Black B Solution(지용성 염료) -70% ethanol에 Sudan Black B를 넣는다.(포화될 정도의 양) -가라앉을 때까지 기다린 다음, 상층액을 취하여 filtering한다. 25%,50%,70% EtOH (에탄올 참고문헌 5.참고문헌 http://en.wikipedia.org/wiki/Sudan_stain http://www.loci.wisc.edu/optical/ows.html